Bệnh cúm lợn có gây nguy cơ tử vong cao cho lợn mắc bệnh hay không? Chẩn đoán bệnh cúm lợn bằng phương pháp  ELISA phát hiện kháng thể cần dùng loại kit nào?

Nội dung chính

• Bệnh cúm lợn có gây nguy cơ tử vong cao cho lợn mắc bệnh hay không?
• Chẩn đoán bệnh cúm lợn bằng phương pháp ELISA phát hiện kháng thể cần dùng loại kit nào?
• Thực hiện Phương pháp ELISA phát hiện kháng thể cúm type A để chẩn đoán bệnh cúm lợn như thế nào?

Bệnh cúm lợn có gây nguy cơ tử vong cao cho lợn mắc bệnh hay không?

Theo tiểu mục 5.1 Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-25:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 25: Bệnh cúm lợn quy định về chẩn đoán lâm sàng như sau"

Cách tiến hành

5.1. Chẩn đoán lâm sàng

5.1.1. Đặc điểm dịch tễ

Cúm lợn là một bệnh hô hấp cấp tính ở lợn có tính lây truyền nhanh. Tỷ lệ mắc thường cao, tỷ lệ tử vong thấp (từ 1% đến 4%). Vi rút lây truyền qua đường không khí hoặc qua tiếp xúc (trực tiếp hoặc gián tiếp). Lợn có thể mang mầm bệnh mà không có triệu chứng. Bệnh có thể xảy ra quanh năm nhưng chủ yếu vào mùa thu và mùa đông và ở lợn từ 4 đến 6 tuần tuổi.

5.1.2. Triệu chứng lâm sàng

Thể cấp tính: Bệnh có các triệu chứng ho, ho co giật từng cơn, hắt hơi, chảy nước mắt nước mũi, khó thở, biếng ăn, sốt từ 40,5 °C đến 42,5 °C kéo dài 4 ngày đến 5 ngày liền.

Thể mãn tính: Bệnh có triệu chứng ho nhẹ, con vật chậm lớn, đàn con phát triển không đồng đều.

Bệnh cúm lợn rất dễ lây truyền do tiếp xúc trực tiếp giữa lợn khỏe mạnh và lợn bị bệnh qua đường hô hấp chủ yếu qua mõm và do hít thở không khí có chứa vi rút.

5.1.3. Bệnh tích

Thể cấp tính: Bệnh tích thường thấy là viêm phế quản, phổi hoặc viêm rải rác các thùy phổi, tập trung ở một khối thùy ở lợn con bú mẹ hoặc lợn con cai sữa có bệnh tích viêm phổi cata, vùng viêm sưng cứng, có tổ chức phổi chắc, màu nâu hoặc xám mặt cắt ướt. Cắt phế quản, tiểu phế quản và bóp thấy chảy ra dịch đục dính, màu đỏ hoặc xám, phế quản và phế nang chứa tương dịch.

5.1.4. Bệnh tích vi thể

Xung quanh phế quản và mạch quản có thâm nhiễm tế bào như lâm ba cầu, bạch cầu đa nhân trung tính. Bệnh tích cũ thấy có những ổ cazein (bã đậu), mủ, tạo hốc do tác động của tạp khuẩn kế phát.

Thể mạn tính: Lợn bị bệnh vùng phổi bị viêm có giới hạn rõ ràng với vùng phổi khỏe, ở lợn con bú mẹ có triệu chứng hạch phế quản sưng. Ngoài ra, có bệnh tích viêm dạ dày, sưng hạch màng treo ruột.

Theo đó, bệnh cúm lợn là bệnh truyền nhiễm lây truyền nhanh; tỷ lệ mắc bệnh thường cao nhưng tỷ lệ gây tử vong ở cá thể mắc bệnh lại thấp chỉ từ 1% đến 4%

Bệnh cúm lợn có gây nguy có tử vong cao cho lợn mắc bệnh hay không? (Hình từ Internet)

Chẩn đoán bệnh cúm lợn bằng phương pháp ELISA phát hiện kháng thể cần dùng loại kit nào?

Theo tiết 5.2.3.2 tiểu mục 5.2 Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-25:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 25: Bệnh cúm lợn quy định về phương pháp ELISA như sau:

Cách tiến hành

...

5.2. Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm

....

5.2.3.2. Phương pháp ELISA phát hiện kháng thể

Sử dụng mẫu bệnh phẩm là huyết thanh của lợn ốm.

Sử dụng kít ELISA thương mại và thực hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất (Xem phụ lục E).

Theo đó, muốn chẩn đoán bệnh cúm lợn thông qua mẫu bệnh phẩm là mẫu máu ở lợn bằng phương pháp ELISA thì cần sử dụng kit ELISA thương mại và thực hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

Thực hiện Phương pháp ELISA phát hiện kháng thể cúm type A để chẩn đoán bệnh cúm lợn như thế nào?

Theo Phụ lục E Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-25:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 25: Bệnh cúm lợn quy định về các bước thực hiện phương pháp ELISA nhằm chẩn đoán bệnh cúm lợn như sau:

PHỤ LỤC E

(Tham khảo)

Phương pháp ELISA phát hiện kháng thể cúm type A

Hiện nay có rất nhiều các loại kít phát hiện kháng thể cúm khác nhau được cung cấp trên thị trường nên khi sử dụng tuân theo qui trình của nhà sản xuất.

Nếu sử dụng bộ kit chẩn đoán

- Influenza A Virus Antibody Test Kit của IDEXX thì các bước tiến hành được thực hiện như sau:

- Bước 1: Chuẩn bị bộ kit: số mẫu + 01 đối chứng dương + 01 đối chứng âm

- Bước 2: Pha loãng mẫu với tỷ lệ 1/10:10 μl mẫu kiểm tra + 90 μl dung dịch pha loãng mẫu trong ống pha loãng. Sau đó chuyển 100 μl dung dịch mẫu kiểm tra đã pha loãng sang đĩa ELISA với sơ đồ bố trí mẫu tương ứng.

* Nhỏ 100 μl đối chứng âm và đối chứng dương (không pha loãng) vào đĩa ELISA theo vị trí bố trí.

- Bước 3: Vỗ nhẹ đĩa , đậy nắp. Ủ ở nhiệt độ phòng trong 60 min

- Bước 4: Pha nước rửa đĩa 1X từ dung dịch rửa đĩa 10X có sẵn trong bộ kit.

- Bước 5: Sau 60 min ủ đĩa, đổ bỏ dung dịch trong đĩa, rửa đĩa 3 lần với lượng 300 μl /giếng bằng dung dịch rửa đĩa 1X.

- Bước 6: Nhỏ 100 μl chất gắn kết (conjugate) vào tất cả các giếng. Ủ tiếp đĩa ở nhiệt độ phòng trong 60 min.

- Bước 7: Sau đó đổ bỏ dung dịch trong đĩa, rửa đĩa 3 lần với lượng 300 μl/giếng bằng dung dịch rửa đĩa 1X.

- Bước 8: Nhỏ 100 μl cơ chất vào các giếng, ủ đĩa trong 15 min.

- Bước 9: Dừng phản ứng bằng cách cho 100 μl dung dịch stop vào các giếng.

- Bước 10: Đọc đĩa ở bước sóng 650 nm và tính kết quả.

Phản ứng được công nhận khi:

+ OD của đối chứng âm >0,6

+ OD của đối chứng dương - OD của đối chứng âm ≤ 0,6

S/N= (OD của mẫu -OD của đối chứng âm)

Đánh giá kết quả:

+ Mẫu dương tính: S/N không lớn hơn 0,6

+ Mẫu âm tính: S/N Lớn hơn 0,6

CHÚ THÍCH: - ĐC (-): mẫu đối chứng âm.

- ĐC (+): mẫu đối chứng dương.

- S1, S2. S3...,S80: mẫu huyết thanh cần kiểm tra số 1, số 2, số 3,..đến mẫu số 80.

Như vậy, phương pháp ELISA nhằm chẩn đoán bệnh cúm lợn được thực hiện theo mười bước theo tiêu chuẩn vừa nêu trên.

Phản ứng trong phương pháp ELISA được công nhận khi:

-OD của đối chứng âm >0,6

- OD của đối chứng dương - OD của đối chứng âm ≤ 0,6

S/N= (OD của mẫu -OD của đối chứng âm)

Đánh giá kết quả:

- Mẫu dương tính: S/N không lớn hơn 0,6

- Mẫu âm tính: S/N Lớn hơn 0,6