Để chẩn đoán bệnh Perkinsus Marinus ở hàu bằng phương pháp nuôi cấy thì cần chuẩn bị mẫu bệnh phẩm như thế nào?

Nội dung chính

• Để chẩn đoán bệnh Perkinsus Marinus ở hàu bằng phương pháp nuôi cấy thì cần chuẩn bị mẫu bệnh phẩm như thế nào?
• Chẩn đoán bệnh Perkinsus Marinus ở hàu bằng phương pháp nuôi cấy có bao nhiêu bước thực hiện?
• Mẫu bệnh phẩm sau khi thực hiện phương pháp nuôi cấy cho kết quả như thế nào thì kết luận hàu mắc bệnh Perkinsus Marinus?

Để chẩn đoán bệnh Perkinsus Marinus ở hàu bằng phương pháp nuôi cấy thì cần chuẩn bị mẫu bệnh phẩm như thế nào?

Theo tiết 6.1.1, 6.1.2 và tiết 6.1.3 tiểu mục 6.1 Mục 6 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8710-10:2015 về Bệnh thủy sản - Quy trình chuẩn đoán - Phần 10: Bệnh do Perkinsus Marinus ở nhuyễn thể hai mảnh nhỏ quy định về mẫu bệnh phẩm dùng cho phương pháp nuôi cấy để chẩn đoán bệnh Perkinsus Marinus ở hàu như sau:

Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm

6.1. Phương pháp nuôi cấy

6.1.1. Lấy mẫu

Số lượng nhuyễn thể hai mảnh vỏ trên mỗi mẫu tùy thuộc vào kích cỡ của nhuyễn thể nhuyễn thể hai mảnh vỏ:

- Nhuyễn thể hai mảnh vỏ giống: lấy từ 10 con/mẫu đến 15 con/mẫu.

- Nhuyễn thể hai mảnh vỏ trưởng thành: lấy từ 5 con/mẫu đến 10 con/mẫu.

6.1.2. Bảo quản mẫu

Trong quá trình vận chuyển từ nơi thu mẫu về đến phòng thử nghiệm mẫu được bảo quản ở nhiệt độ từ 2 oC đến 8 oC không quá 24 h.

Mẫu chuyển đến phòng thí nghiệm phải được phân tích ngay.

6.1.3. Chuẩn bị mẫu

- Nhuyễn thể hai mảnh vỏ còn sống hoặc vừa chết chưa tách vỏ;

- Dùng dao mổ vô trùng cắt cơ mở vỏ nhuyễn thể hai mảnh vỏ và tách ra làm hai;

- Dùng panh, kéo vô trùng cắt 1 mẫu bệnh phẩm từ 5 mm đến 10 mm của phần mô áo, mang, ruột, phần cơ bị tổn thương;

CHÚ THÍCH: Phải dùng các dụng cụ vô trùng khi lấy mô ở các mẫu khác nhau để tránh lây nhiễm.

Theo đó, tùy việc lựa chọn mẫu bệnh phẩm là hàu giống hay hàu trưởng thành mà số lượng mẫu bệnh phẩm cần dùng sẽ khác nhau, cụ thể như sau:

- Nhuyễn thể hai mảnh vỏ giống: lấy từ 10 con/mẫu đến 15 con/mẫu.

- Nhuyễn thể hai mảnh vỏ trưởng thành: lấy từ 5 con/mẫu đến 10 con/mẫu.

Sau khi lấy đủ số lượng mẫu bệnh phẩm cần thiết để chuyển đến phòng thí nghiệm để chẩn đoán bệnh thì mẫu bệnh phẩm cần được bảo quản ở nhiệt độ từ 2 oC đến 8 oC không quá 24 h. Mẫu chuyển đến phòng thí nghiệm phải được phân tích ngay.

Cần lưu ý một số điều khi chuẩn bị mẫu bệnh phẩm cho việc chẩn đoán bệnh Perkinsus Marinus bằng phương pháp nuôi cấy như sau:

- Nhuyễn thể hai mảnh vỏ còn sống hoặc vừa chết chưa tách vỏ;

- Dùng dao mổ vô trùng cắt cơ mở vỏ nhuyễn thể hai mảnh vỏ và tách ra làm hai;

- Dùng panh, kéo vô trùng cắt 1 mẫu bệnh phẩm từ 5 mm đến 10 mm của phần mô áo, mang, ruột, phần cơ bị tổn thương.

Trong quá trình chuẩn bị mẫu bệnh phẩm cần sư dụng các dụng cụ vô trùng khi lấy mô ở các mẫu khác nhau để tránh lây nhiễm.

Để chẩn đoán bệnh Perkinsus Marinus ở hàu bằng phương pháp nuôi cấy thì cần chuẩn bị mẫu bệnh phẩm như thế nào? (Hình từ Internet)

Chẩn đoán bệnh Perkinsus Marinus ở hàu bằng phương pháp nuôi cấy có bao nhiêu bước thực hiện?

Theo tiết 6.1.4 tiểu mục 6.1 Mục 6 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8710-10:2015 về Bệnh thủy sản - Quy trình chuẩn đoán - Phần 10: Bệnh do Perkinsus Marinus ở nhuyễn thể hai mảnh nhỏ quy định về các bước thực hiện phương pháp nuôi cấy để chẩn đoán bệnh Perkinsus Marinus ở hàu như sau:

Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm

...

6.1.4. Cách tiến hành

Bước 1: Cho mẫu bệnh phẩm đã chuẩn bị (6.1.3) vào các ống nghiệm (4.1.3) chứa 9,5 ml FTM (3.1.1) có bổ sung thêm 0,5 ml dung dịch penicilin-streptomycin (3.1.2) và 50 ml nystatin (3.1.4). Ống nghiệm được đóng kín và lắc để mẫu bệnh phẩm chìm trong môi trường;

Bước 2: Ủ ống nghiệm chứa mẫu bệnh phẩm trong điều kiện không có ánh sáng, ở nhiệt độ từ 22 °C đến 25 °C trong 5 ngày đến 7 ngày;

Bước 3: Dùng panh vô trùng lấy mẫu bệnh phẩm được ủ ra khỏi môi trường FTM và đặt lên phiến kính (4.1.4);

Bước 4: Dùng đầu côn vô trùng xé nhỏ mẫu bệnh phẩm để nhuộm lugol iodine;

Bước 5: Nhỏ 1 hoặc 2 giọt lugol iodine (3.1.3) vào mẫu bệnh phẩm bằng pipet pasteur (4.1.7), đặt lamen lên mẫu bệnh phẩm và kiểm tra dưới kính hiển vi quang học (4.1.2), sử dụng vật kính 10 X, 40 X và 100 X;

CHÚ THÍCH: Nếu không tiến hành các bước tiếp theo để đọc kết quả sau 7 ngày ủ, các ống nghiệm chứa mẫu được bảo quản ở nhiệt độ từ 2 °C đến 3 °C trong khoảng 3 tuần ở điều kiện không có ánh sáng.

...

Như vậy, việc chẩn đoán bệnh Perkinsus Marinus ở hàu bằng phương pháp nuôi cấy gồm 04 bước thực hiện theo tiêu chuẩn nêu trên.

Sau khi thực hiện đủ 04 bước trong phương pháp nuôi cấy mà không tiến hành các bước tiếp theo để đọc kết quả sau 7 ngày ủ, các ống nghiệm chứa mẫu được bảo quản ở nhiệt độ từ 2 °C đến 3 °C trong khoảng 3 tuần ở điều kiện không có ánh sáng.

Mẫu bệnh phẩm sau khi thực hiện phương pháp nuôi cấy cho kết quả như thế nào thì kết luận hàu mắc bệnh Perkinsus Marinus?

Theo tiết 6.1.5 tiểu mục 6.1 Mục 6 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8710-10:2015 về Bệnh thủy sản - Quy trình chuẩn đoán - Phần 10: Bệnh do Perkinsus Marinus ở nhuyễn thể hai mảnh nhỏ quy định kết quả của phương pháp nuôi cấy như sau:

Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm

...

6.1.5. Đọc kết quả

Mẫu dương tính với Perkinsus sp. khi quan sát dưới kính hiển vi thấy thể bào tử dinh dưỡng có vách tế bào nhuộm hình cầu tròn có màu xanh hoặc xanh đen, kích thước (từ 2 mm đến 10 mm) x (từ 20 mm đến 70 mm).

Mẫu âm tính với Perkinsus sp. khi quan sát dưới kính hiển vi không thấy thể bào tử dinh dưỡng có đặc điểm như trên.

Theo đó, nếu quan sát dưới kính hiển vi thấy thể bào tử dinh dưỡng có vách tế bào nhuộm hình cầu tròn có màu xanh hoặc xanh đen, kích thước (từ 2 mm đến 10 mm) x (từ 20 mm đến 70 mm) thì kết luật mẫu bệnh phẩm dương tính (hàu mắc bệnh Perkinsus Marinus).

Trường hợp khi quan sát dưới kính hiển vi không thấy thể bào tử dinh dưỡng có đặc điểm dương tính với Perkinsus sp thì mẫu bệnh phẩm âm tính (hàu không mắc bệnh Perkinsus Marinus).