Để chẩn đoán bệnh sán lá gan ở bò bằng phương pháp ELISA thì cần chuẩn bị những gì? Cần bao nhiêu huyết thanh ở bò dùng cho phương pháp ELISA?

Nội dung chính

• Để chẩn đoán bệnh sán lá gan ở bò bằng phương pháp ELISA thì cần chuẩn bị những gì?
• Số lượng mẫu huyết thanh ở bò dùng cho phương pháp ELISA để chẩn đoán bệnh sán lá gan là bao nhiêu?
• Phương pháp ELISA dùng để chẩn đoán bệnh sán lá gan ở bò được tiến hành như thế nào?

Để chẩn đoán bệnh sán lá gan ở bò bằng phương pháp ELISA thì cần chuẩn bị những gì?

Theo tiết 5.2.3 tiểu mục 5.2 Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-27:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 27: Bệnh sán lá gan quy định về phương pháp ELISA như sau:

Cách tiến hành

...

5.2. Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm

...

5.2.3. Phát hiện kháng thể bằng phương pháp ELISA

Hiện nay các kít ELISA thương mại đã có sẵn trên thị trường dùng để phát hiện kháng thể sán lá gan trên trâu bò (xem phụ lục C).

CHÚ THÍCH: kít phát hiện kháng thể sán lá gan không thể phân biệt được kháng thể do nhiễm tự nhiên hay kháng thể do tiêm vắc xin.

...

Theo điểm C.1 Phụ lục C Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-27:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 27: Bệnh sán lá gan quy định về nguyên liệu cần chuẩn bị cho phương pháp ELISA như sau:

PHỤ LỤC C

(Tham khảo)

Phương pháp ELISA phát hiện kháng thể sán lá gan

Có thể sử dụng bộ kit có bán sẵn để phát hiện kháng thể sán lá gan có trong mẫu huyết thanh và sữa.

CHÚ THÍCH: do chi phí phát hiện kháng thể sán lá gan bằng phương pháp ELISA cao nên thường dùng trong điều tra huyết thanh học.

C.1. Chuẩn bị nguyên liệu

- Dung dịch rửa (20 X): pha loãng dung dịch rửa với nước cát đã khử ion theo tỷ lệ 1/20 (cho 50 ml dung dịch rửa 20 X vào 950 ml nước cát đã khử ion);

- Kháng kháng thể gắn enzyme peroxidase (100 X): pha loãng kháng kháng thể gắn enzyme peroxidase với dung dịch đệm 1 theo tỷ lệ 1/100 (cho 10 μl kháng kháng thể gắn enzyme peroxidase 100 X vào 990 μl dung dịch đệm 1);

- Pha loãng mẫu:

1) Đối với mẫu đối chứng và đối chứng dương cần pha loãng theo tỷ lệ 1/20 bằng dung dịch đệm 2);

2. Đối với mẫu huyết thanh kiểm tra: pha loãng mẫu huyết thanh cần kiểm tra theo tỷ lệ 1/20 bằng dung dịch đêm 2 (cho 10 μl huyết thanh cần kiểm tra (cho 10 μl mẫu huyết thanh cần kiểm tra vào 190 μl dung dịch đệm 2);

...

Theo đó, để chẩn đoán bệnh sán lá gan ở bò bằng phương pháp ELISA thì cần chuẩn bị:

- Bộ kít ELISA thương mại;

- Dung dịch rửa (20 X)

- Kháng kháng thể gắn enzyme peroxidase (100 X)

- Pha loãng mẫu:

+ Đối với mẫu đối chứng và đối chứng dương cần pha loãng theo tỷ lệ 1/20 bằng dung dịch đệm 2);

+ Đối với mẫu huyết thanh kiểm tra: pha loãng mẫu huyết thanh cần kiểm tra theo tỷ lệ 1/20 bằng dung dịch đêm 2 (cho 10 μl huyết thanh cần kiểm tra (cho 10 μl mẫu huyết thanh cần kiểm tra vào 190 μl dung dịch đệm 2);

Do chi phí phát hiện kháng thể sán lá gan bằng phương pháp ELISA cao nên thường dùng trong điều tra huyết thanh học.

Để chẩn đoán bệnh sán lá gan ở bò bằng phương pháp ELISA thì cần chuẩn bị những gì? (Hình từ Internet)

Số lượng mẫu huyết thanh ở bò dùng cho phương pháp ELISA để chẩn đoán bệnh sán lá gan là bao nhiêu?

Theo tiết 5.2.1.1 tiểu mục 5.2 Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-27:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 27: Bệnh sán lá gan quy định về lấy mẫu cho xét nghiệm kháng thể như sau:

Cách tiến hành

...

5.2. Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm

...

5.2.1. Lấy mẫu

5.2.1.1. Lấy mẫu cho xét nghiệm kháng thể

- Mẫu huyết thanh: sử dụng xy lanh vô trùng để lấy 1 ml đến 5 ml máu ở tĩnh mạch cổ hoặc động mạch đuôi của trâu, bò, dê, cừu nghi mắc bệnh chưa tiêm vắc xin phòng bệnh sán lá gan. Máu lấy ra được chứa trong bơm tiêm, rút pit tông tạo khoảng trống (hoặc bơm máu vào ống nghiệm vô trùng), ghi ký hiệu mẫu trên bơm tiêm hoặc ống nghiệm rồi đặt nằm nghiêng 45° trong hộp đựng mẫu, để đông máu trong 1 h đến 2 h ở nhiệt độ bình thường, tránh ánh nắng trực tiếp. Sau đó, chất huyết thanh sang ống nghiệm vô trùng khác (hoặc ống eppendorf) thực hiện xét nghiệm mô tả tại 5.2.3 - phát hiện kháng thể bằng phương pháp ELISA;

- Mẫu sữa: lấy sữa trực tiếp ngay từ con vật hoặc lấy sữa đã vắt cho vào ống vô trùng có nắp đậy để thực hiện xét nghiệm mô tả tại 5.2.3 - phát hiện kháng thể bằng phương pháp ELISA.

...

Từ tiêu chuẩn trên thì mẫu huyết thanh ở bò dùng cho phương pháp ELISA để chẩn đoán bệnh sán lá gan cần từ 1 ml đến 5 ml.

Dùng xy lanh vô trùng để lấy mẫu ở tĩnh mạch cổ hoặc động mạch đuôi của của bò mắc bệnh sán lá gan (chưa tiêm vắc xin phòng bệnh).

Máu lấy ra được chứa trong bơm tiêm, rút pit tông tạo khoảng trống (hoặc bơm máu vào ống nghiệm vô trùng), ghi ký hiệu mẫu trên bơm tiêm hoặc ống nghiệm rồi đặt nằm nghiêng 45° trong hộp đựng mẫu, để đông máu trong 1 h đến 2 h ở nhiệt độ bình thường, tránh ánh nắng trực tiếp.

Sau đó, chất huyết thanh sang ống nghiệm vô trùng khác (hoặc ống eppendorf) thực hiện xét nghiệm phát hiện kháng thể bằng phương pháp ELISA.

Phương pháp ELISA dùng để chẩn đoán bệnh sán lá gan ở bò được tiến hành như thế nào?

Theo điểm C.2 Phụ lục C Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-27:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 27: Bệnh sán lá gan quy định về cách tiến hành phương pháp ELISA như sau:

- Nhỏ vào hai giếng, mỗi giếng 200 μl đối chứng âm đã pha loãng;

- Nhỏ vào bốn giếng, mỗi giếng 200 μl đối chứng dương đã pha loãng;

- Nhỏ vào hai giếng, mỗi giếng 200 μl huyết thanh cần kiểm tra đã pha loãng;

- Hoặc nhỏ vào hai giếng, mỗi giếng 200 μl mẫu sữa không pha loãng (theo sơ đồ, đĩa. phản ứng ELISA phát hiện kháng thể);

- Lắc đều đĩa; phủ đỉa bằng giấy nhôm hoặc giấy dính, ủ đĩa 1 h ở tủ ấm 37 °C (4.4);

- Rửa đĩa ba lần bằng dung dịch rửa đã pha loãng;

- Cho 100 μl kháng kháng thể gắn enzyme peroxidase đã pha loãng vào từng giếng, phủ đĩa và ủ ở tủ ấm 37 °C trong vòng 30 min;

- Rửa đĩa ba lần bằng dung dịch rửa đã pha loãng;

- Cho 100 μl TMB vào từng giếng;

- Ủ đĩa ở 21 °C trong 20 min, tránh ánh sáng;

- Cho 100 μl dung dịch dừng phản ứng;

- Lắc đều đĩa cho đến khi có màu đồng nhất;

- Đọc đĩa ở bước sóng 450 nm bằng máy đọc ELISA.