Để chẩn đoán bệnh truyền nhiễm do ký sinh trùng Bonamia gây nên ở hàu thì có buộc phải lấy hàu còn sống để làm thí nghiệm không?

Nội dung chính

• Để chẩn đoán bệnh truyền nhiễm do ký sinh trùng Bonamia gây nên ở hàu thì có buộc phải lấy hàu còn sống để làm thí nghiệm không?
• Hàu dùng để làm thí nghiệm chẩn đoán bệnh truyền nhiễm do ký sinh trùng Bonamia gây nên cần được bảo quản như thế nào?
• Khi tiến hành thí nghiệm chẩn đoán bệnh truyền nhiễm do ký sinh trùng Bonamia gây nên ở hàu cần chuẩn bị thuốc thử và vật liệu thử nào?

Để chẩn đoán bệnh truyền nhiễm do ký sinh trùng Bonamia gây nên ở hàu thì có buộc phải lấy hàu còn sống để làm thí nghiệm không?

Mẫu thí nghiệm để chẩn đoán bệnh truyền nhiễm do ký sinh trùng Bonamia gây nên quy định tại tiết 6.1.1 tiểu mục 6.1 Mục 6 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8710-25:2022 về Bệnh thủy sản - Quy trình chẩn đoán - Phần 25: Bệnh do ký sinh trùng Bonamia ostreae và Bonamia exitiosa ở hàu như sau:

Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm

6.1 Lấy mẫu, bảo quản mẫu

6.1.1 Lấy mẫu

Lấy những hàu còn sống, sắp chết hoặc mới chết.

- Hàu giống: Lấy từ 10 con đến 15 con cho vào túi lynon (4.1.12)

- Hàu trưởng thành: Lấy từ 5 con đến 10 con cho vào túi lynon (4.1.12).

Đối với mẫu dùng cho xét nghiệm vi thể: Dùng pank, kéo vô trùng cắt mẫu bệnh phẩm của mô mang, màng áo, tuyến tiêu hóa với kích thước khoảng 3 mm và cố định mẫu tại hiện trường trong dung dịch formalin 10 % (3.3.1) hoặc dung dịch Davidson (3.3.3).

...

Theo quy định trên thì để chẩn đoán hàu có mắc bệnh truyền nhiệm do ký sinh trùng Bonamia gây nên hay không thì có thể sử dụng hàu còn sống, sắp chết hoặc mới chết.

Tùy thuộc vào loại hàu cần chuẩn đoán mà số lượng mẫu vật cần lấy sẽ khác nhau:

- Hàu giống: Lấy từ 10 con đến 15 con

- Hàu trưởng thành: Lấy từ 5 con đến 10 con.

Lưu ý: Đối với mẫu dùng cho xét nghiệm vi thể cần dùng pank, kéo vô trùng cắt mẫu bệnh phẩm của mô mang, màng áo, tuyến tiêu hóa với kích thước khoảng 3 mm và cố định mẫu tại hiện trường trong dung dịch formalin 10 % hoặc dung dịch Davidson.

Để chẩn đoán bệnh truyền nhiễm do ký sinh trùng Bonamia gây nên ở hàu thì có buộc phải lấy hàu còn sống để làm thí nghiệm không? (Hình từ Internet)

Hàu dùng để làm thí nghiệm chẩn đoán bệnh truyền nhiễm do ký sinh trùng Bonamia gây nên cần được bảo quản như thế nào?

Việc bảo quản mẫu thí nghiệm được quy định tại tiết 6.1.2 tiểu mục 6.1 Mục 6 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8710-25:2022 về Bệnh thủy sản - Quy trình chẩn đoán - Phần 25: Bệnh do ký sinh trùng Bonamia ostreae và Bonamia exitiosa ở hàu như sau:

Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm

6.1 Lấy mẫu, bảo quản mẫu

...

6.1.2 Bảo quản mẫu

Mẫu được bảo quản ở nhiệt độ từ 2°C đến 8 °C và vận chuyển tới phòng thí nghiệm trong vòng 24 h.

Mẫu chuyển đến phòng thí nghiệm nếu chưa phân tích ngay phải được bảo quản trong tủ lạnh âm sâu (4.1.7), hoặc trong etanol từ 96 % đến 100 % (3.1.1).

Tất cả các mẫu phải được dán nhãn, ghi kí hiệu và gửi kèm theo phiếu gửi mẫu bệnh phẩm và các thông tin dịch tễ, triệu chứng lâm sàng và bệnh tích của ca bệnh.

Đối với mẫu cho xét nghiệm vi thể, nếu không có dung dịch bảo quản mẫu cho xét nghiệm vi thể tại hiện trường thì vận chuyển sống cả con về phòng thí nghiệm (không được bảo quản trong điều kiện lạnh).

...

Như vậy, hàu được lấy làm thí nghiệm để chẩn đoán bệnh truyền nhiệm do ký sinh trùng Bonamia gây nên cần được bảo quản ở nhiệt độ từ 2°C đến 8 °C và vận chuyển tới phòng thí nghiệm trong vòng 24 h.

Mẫu chuyển đến phòng thí nghiệm nếu chưa phân tích ngay phải được bảo quản trong tủ lạnh âm sâu hoặc trong etanol từ 96 % đến 100 %.

Lưu ý: Tất cả các mẫu phải được dán nhãn, ghi kí hiệu và gửi kèm theo phiếu gửi mẫu bệnh phẩm và các thông tin dịch tễ, triệu chứng lâm sàng và bệnh tích của ca bệnh.

Trường hợp tiến hành xét nghiệm vi thể, nếu không có dung dịch bảo quản mẫu cho xét nghiệm vi thể tại hiện trường thì vận chuyển sống cả con về phòng thí nghiệm (không được bảo quản trong điều kiện lạnh).

Khi tiến hành thí nghiệm chẩn đoán bệnh truyền nhiễm do ký sinh trùng Bonamia gây nên ở hàu cần chuẩn bị thuốc thử và vật liệu thử nào?

Một số loại thuốc thử và vật liệu thử được sử dụng khi tiến hành thí nghiệm chẩn đoán bệnh truyền nhiệm do ký sinh trùng Bonamia gây nên ở hàu gồm các loại được quy định tại Mục 3 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8710-25:2022 về Bệnh thủy sản - Quy trình chẩn đoán - Phần 25: Bệnh do ký sinh trùng Bonamia ostreae và Bonamia exitiosa ở hàu như sau:

(1) Thuốc thử và vật liệu thử dùng chung

- Etanol, từ 70 % đến 100 % (thể tích)

- Dung dịch muối đệm phosphat

- Dung dịch natri hydoroxit (NaOH), 1 N

- Dung dịch axit clohydric (HCl), 1 N

(2) Thuốc thử và vật liệu thử dùng cho phương pháp chẩn đoán bằng PCR và Realtime PCR

- Cặp mồi, gồm mồi xuôi và mồi ngược

- Đoạn dò

- Kít tách chiết ADN

- Kít nhân gen cho phản ứng PCR

- Kít nhân gen cho phản ứng Realtime PCR

- Dung dịch đệm TAE hoặc TBE (xem A.1, Phụ lục A).

- Chất nhuộm màu, ví dụ: Gel red hoặc SYBR safe 1)

- Chất đệm tải mẫu

- Dung dịch đệm TE (Tris-axit etylendiamintetraaxetic).

- Thang chuẩn ADN (Ladder), phân vạch 100 bp

- Nước tinh khiết, không có nuclease

- Thạch agarose

- Mẫu chuẩn dương, được chứng nhận là dương tính hoặc ADN chuẩn dương tách chiết từ mẫu chuẩn dương có giá trị Ct (Chu kỳ ngưỡng đã biết trước).

(3) Thuốc thử và vật liệu dùng cho phương pháp kiểm tra bệnh tích vi thể bằng phương pháp nhuộm HE

- Formalin, dung dịch 10 % (thể tích): Pha dung dịch formaldehyd 38 % với dung dịch PBS hoặc nước cất theo tỷ lệ thể tích 1:9.

- Xylen

- Dung dịch Davidson

- Thuốc nhuộm Haematoxylin

- Thuốc nhuộm Eosin

- Parafin, có nhiệt độ tan chảy từ 56 °C đến 60 °C

- Keo dán lamen (Bom Canada).