Mẫu bệnh phẩm dùng trong phương pháp PCR để chẩn đoán bệnh gan thận mủ ở cá phải được bảo quản ở bao nhiêu độ C?

Nội dung chính

• Cá basa nhiệm bệnh gan thận mủ ở cá thì sẽ có dấu hiệu bệnh tích ra sao?
• Mẫu bệnh phẩm dùng trong phương pháp PCR để chẩn đoán bệnh gan thận mủ ở cá phải được bảo quản ở bao nhiêu độ C?
• Quá trình tách chiết ADN bằng phương pháp PCR để chẩn đoán bệnh gan thận mủ ở cá basa được thực hiện như thế nào?

Cá basa nhiệm bệnh gan thận mủ ở cá thì sẽ có dấu hiệu bệnh tích ra sao?

Theo Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8710-16:2016 về Bệnh thủy sản - Quy trình chẩn đoán - Phần 16: Bệnh gan thận mủ ở cá da trơn quy định về dấu hiệu bệnh tích ở cá basa khi nhiệm bệnh gan thận mủ như sau:

Chẩn đoán lâm sàng

5.1 Đặc điểm dịch tễ

- Loài mẫn cảm: Cá tra, cá basa và một số loài cá da trơn nước ngọt khác;

- Mùa xuất hiện bệnh: Bệnh gan thận mủ xuất hiện trên cá tra hầu như quanh năm, nhưng bệnh xảy ra nặng nhất vào lúc giao mùa, mùa mưa, thường bùng phát vào các tháng 7, 8, 10, 11;

CHÚ THÍCH: Đối với cá da trơn nuôi tại Mỹ thời gian bùng phát bệnh vào mùa xuân và mùa thu.

- Tần suất xuất hiện bệnh: Bệnh xuất hiện nhiều lần trong 1 vụ nuôi;

- Bệnh xảy ra trên cá tra ở tất cả các giai đoạn nuôi, nhưng chủ yếu đối với cá dưới 400 g;

- Đường lây truyền: Edwardsiella ictaluri có thể xâm nhập vào cơ thể cá từ môi trường nước qua da, qua mang cá hoặc qua miệng.

5.2 Triệu chứng lâm sàng

5.2.1 Giai đoạn cá mới nhiễm bệnh

- Bên ngoài thân cá bình thường không biểu hiện xuất huyết, mắt hơi lồi.

5.2.2 Giai đoạn cá nhiễm nặng

- Cá bơi lờ đờ trên mặt nước, không có phản ứng với tiếng động xung quanh;

- Cá giảm ăn hoặc bỏ ăn hoàn toàn;

- Cá có hiện tượng xuất huyết trên da, các gốc vây, hậu môn, phù mắt và sưng đầu;

- Gan, thận, lách có nhiều đốm trắng (như đốm mủ);

- Một số cá bệnh còn biểu hiện màu sắc nhợt nhạt, số lượng cá chết hàng ngày cao và tỷ lệ chết tăng dần.

5.3 Bệnh tích

- Mổ khám quan sát thấy có nhiều đốm trắng trên gan, thận và lách;

- Thận, lách có hiện tượng xuất huyết, nhiều vùng bị hoại tử trầm trọng.

Từ Tiêu chuẩn trên thì các nhiễm bệnh gan thận mủ thì khi mổ cá ra sẽ thấy có nhiều đốm trắng trên gan, thận và lách. Bên cạnh đó, thận, lách có hiện tượng xuất huyết, nhiều vùng bị hoại tử trầm trọng.

Mẫu bệnh phẩm dùng trong phương pháp PCR để chẩn đoán bệnh gan thận mủ ở cá phải được bảo quản ở bao nhiêu độ C? (Hình từ Internet)

Mẫu bệnh phẩm dùng trong phương pháp PCR để chẩn đoán bệnh gan thận mủ ở cá phải được bảo quản ở bao nhiêu độ C?

Theo tiết 6.2.2 tiểu mục 6.2 Mục 6 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8710-16:2016 về Bệnh thủy sản - Quy trình chẩn đoán - Phần 16: Bệnh gan thận mủ ở cá da trơn quy định về việc bảo quản mẫu bệnh phẩm trong phương pháp PCR như sau:

Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm

...

6.2 Xác định Edwardsiella ictaluri bằng phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction)

...

6.2.2 Bảo quản mẫu

- Bảo quản mẫu cá nguyên con hoặc gan, thận, lách ở nhiệt độ từ 2°C đến 8°C không quá 24 h;

- Hoặc bảo quản gan, thận, lách trong etanol tuyệt đối (3.1.1);

Mẫu bệnh phẩm chuyển đến phòng thí nghiệm nếu chưa phân tích ngay phải được bảo quản ở nhiệt độ âm 20°C đến âm 80°C hoặc trong etanol tuyệt đối (3.1.1).

...

Theo Tiêu chuẩn nêu trên thì mẫu bệnh phẩm dùng trong phương pháp chẩn đoán PCR để phát hiện bệnh gan thận mủ ở cá basa phải được bảo quản ở nhiệt độ từ 2°C đến 8°C không quá 24 h.

Mẫu bệnh phẩm chuyển đến phòng thí nghiệm nếu chưa phân tích ngay phải được bảo quản ở nhiệt độ âm 20°C đến âm 80°C hoặc trong etanol tuyệt đối

Quá trình tách chiết ADN bằng phương pháp PCR để chẩn đoán bệnh gan thận mủ ở cá basa được thực hiện như thế nào?

Căn cứ Phụ lục D Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8710-16:2016 về Bệnh thủy sản - Quy trình chẩn đoán - Phần 16: Bệnh gan thận mủ ở cá da trơn quy định về quy trình tách chiết ADN bằng phương pháp PCR để chẩn đoán bệnh gan thận mủ ở cá basa như sau:

Quy trình tách chiết ADN

CẢNH BÁO: Việc tách chiết ADN có sử dụng hóa chất nguy hiểm và có khả năng gây hại nếu thao tác không cẩn thận. Do vậy, nên tránh tiếp xúc trực tiếp với da và hít phải hơi của các hóa chất này. Luôn luôn đeo găng tay, khẩu trang, mặc quần áo bảo hộ khi thực hiện các thao tác này.

Quy trình tách chiết ADN sử dụng kit tách chiết ADN: DNAeasy® Blood & Tissue Kit (250) (Cat No. 69506):

- Nhỏ 20 μl protease K vào ống ly tâm 1,5 ml;

- Chuyển 30 mg (6.2.1.1) vào ống ly tâm đã có protease K;

- Thêm 200 μl dung dịch AL (Lysis buffer);

- Trộn kỹ huyễn dịch trong 15 s, sau đó ly tâm nhanh bằng máy spindown (4.2.5);

- Ủ ấm ở 56°C trong 10 min, sau đó ly tâm nhanh bằng máy spindown (4.2.5);

- Thêm 200 μl etanol tuyệt đối (3.1.1) vào ống ly tâm;

- Trộn kỹ huyễn dịch trong 15 s, sau đó ly tâm nhanh bằng máy spindown (4.2.5);

- Hút 420 μl huyễn dịch trong ống ly tâm trên, chuyển sang cột ly tâm có ống thu ở dưới;

- Ly tâm bằng máy ly tâm (4.2.3) với gia tốc 6 000 g trong 1 min ở nhiệt độ phòng;

- Thêm 500 μl dung dịch AW1 (Wash buffer 1) vào cột ly tâm có ống thu ở dưới;

- Thay ống thu ở dưới cột ly tâm;

- Ly tâm bằng máy ly tâm (4.2.3) với gia tốc 6 000 g trong 1 min ở nhiệt độ phòng;

- Thay ống thu ở dưới cột ly tâm;

- Thêm 500 μl dung dịch AW2 (Wash buffer 2) vào cột ly tâm có ống thu ở dưới;

- Ly tâm bằng máy ly tâm (4.2.3) với gia tốc 20 000 g trong 3 min ở nhiệt độ phòng;

- Chuyển cột ly tâm sang ống ly tâm 1,5 ml;

- Nhỏ 200 μl dung dịch AE (Elution buffer) vào cột ly tâm và giữ ở nhiệt độ phòng 1 min;

- Ly tâm bằng máy ly tâm (4.2.3) với tốc độ 6 000 g trong 1 min;

- Chuyển ADN đã thu được sang ống 1,5 ml khác.

Như vậy, việc tách chiết ADN được thực hiện bằng kit tách chiết ADN: DNAeasy® Blood & Tissue Kit (250) (Cat No. 69506). Quy trình tách chiết ADN được thực hiện theo Tiêu chuẩn nêu trên.